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淺析沃特世色譜柱平衡緩沖液的選擇

更新更新時間:2019-10-17

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     沃特世色譜柱是以高純度具有良好機械穩定性的硅膠為基質,通過使用高純度鍵合試劑在硅膠上鍵合季銨強陰離子交換基團,具有季銨和苯基官能團的混合化學結構。這種強陰離子交換相與疏水相的混合模式可以為各種有機化合物如芳香族或脂肪族羧酸和磺酸等提供和高選擇性的分離。硅膠:球形, 高純度(金屬雜質10ppm)
 
    沃特世色譜柱洗脫液的選擇
 
    陰離子交換色譜柱的選擇:
 
    離子交換色譜柱通常粗短,直徑和長度比一般為1:10~1:50。
 
    沃特世色譜柱裝柱:
 
    1、色譜柱安裝要垂直。
 
    2、裝柱時要均勻平整,不能有氣泡。
 
    平衡緩沖液的選擇:
 
    平衡緩沖液是指裝柱后和上樣后用于平衡離子交換色譜柱的緩沖液。
 
    平衡緩沖液的離子強度和pH值要保證各個待分離物質的穩定,要使各個待分離物質與離子交換劑有適當的結合,并盡量使待分離物質和雜質與離子交換劑的結合有較大的差別。
 
    沃特世色譜柱上樣:
 
    上樣方式有正上柱和反上柱。
 
    上樣時注意樣品液的離子強度和pH值,上樣量應小于工作交換量。
 
    沃特世色譜柱洗脫:
 
    1、洗脫液的選擇:
 
    (1)保證所有組分在洗脫液梯度范圍內都是穩定的。
 
    (2)要使結合在離子交換劑上的所有組分在洗脫液梯度范圍內都能夠被洗脫。
 
    (3)梯度范圍盡量小一些,以提高分辨率。
 
    2、洗脫方式:
 
    離子交換色譜一般采用梯度洗脫,通常有改變離子強度和改變pH值兩種洗脫方式。
 
    (1)改變離子強度的洗脫:
 
    在洗脫過程中逐步增大離子強度,從而使與離子交換劑結合的各個組分被洗脫下來。
 
    (2)改變pH值的洗脫:
 
    陽離子交換劑一般是pH值從低到高洗脫,陰離子交換劑一般是pH值從高到低洗脫。
 
    由于pH值可能對蛋白的穩定性有較大的影響,一般采用改變離子強度進行洗脫。

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