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菲羅門液相色譜柱使用后的清洗與保存

更新更新時間:2022-04-21

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  菲羅門液相色譜柱使用一段時間后,總會有一些雜質累積在柱內,保留值較弱的物質,一般能快速從色譜柱沖洗出來,不產生干擾;中等保留強度的雜質能被緩慢沖洗出來,但對分析產生一定的干擾;強保留雜質通常聚集在柱頭或色譜柱中,難以被洗脫,甚至可能與填料發生相互作用,形成新的偽固定相,改變色譜柱的分離性能。通常表現為柱壓升高、基線不平、色譜雙峰、分離性能降低等。這些被污染的色譜柱經清洗后,可恢復部分甚至大部分離能力。因此使用后認真、定期清洗,不僅能延長色譜柱的使用壽命,節省資源,還能大大降低分析的成本。以我們常用的硅膠基質色譜柱為例,簡要闡述常用色譜柱的清洗與再生。
 
  1、菲羅門液相色譜柱的清洗與再生
 
  色譜柱的使用前后都需經較強的流動相沖洗。通常情況下,在使用硅膠、氧化鋁、極性鍵合相色譜柱時,每次用完后可先用二氯甲烷或正己烷等溶劑低流速長時間的沖洗;鍵合反相硅膠色譜柱、離子交換色譜柱和凝膠色譜柱可先用高比例的水(甲醇水混合溶劑)沖洗,再用100%甲醇沖洗。此外,色譜柱低流速的反相沖洗能夠有效除去堵塞在柱頭或篩板上的雜質,以及清洗聚集在柱頭部位的較強吸附物質。有些色譜柱在許多方法處理污染失效后,反過來使用,不僅柱壓降變小,柱效也可恢復如,延長了色譜柱的使用時間。
 
  若上述常規清洗法無法清除污染物,則有必要采用更強的洗脫劑清洗,如反相材料的沖洗順序為:100%甲醇→100%乙腈→乙腈∶異丙醇(75∶25,V/V)→100%異丙醇?;蛘呖梢圆捎幂^低濃度的稀酸或稀堿可將有機溶劑不能洗脫的污染物除去。例如采用0.05mol/L的硫酸和流動相溶液沖洗色譜柱,可取得良好效果;或者采用1%氫氧化銨或50%二甲基甲酰胺水溶液,對聚集在柱頭的污染物具有良好的清洗效果。
 
  如果分析時流動相中含有緩沖液(通常為鹽溶液),沖洗時宜用水取代緩沖液與有機相混合沖洗色譜柱(20倍柱體積);再用100%有機溶劑沖洗。若直接用100%有機溶劑沖洗,可造成緩沖液沉積析出,從而損壞柱子品質。同樣的,若流動相中加入酸、堿溶液時,也應當按照上述方法,先采用高比例的水(水:甲醇10:90)沖洗20倍柱體積,防止強酸強堿溶液導致硅膠基質填料的溶解。
 
  蛋白質對反相色譜柱的污染已成為常見問題,尤其在分離未經處理的動物組織等生物樣品。一般情況下,純有機溶劑如乙腈或甲醇不能很有效地清洗色譜柱,因而需要一些特殊的清洗方法。首先嘗試用高比例強極性溶劑的流動相進行沖洗,如乙腈∶異丙醇(1:2,V/V);或使用0.1%的三水溶液或者0.1%乙酸水溶液清洗。此外,還可以采用1%十二烷基硫酸鈉(SDS),然后用5%~95%乙腈/水(含0.1%TFA)梯度沖洗,去除蛋白污染物效果也較好。
 
  若采用上述的條件清洗后色譜柱仍不能達到理想的效果,有必要將固定相從色譜柱內取出,進行清洗再生后重新裝填。具體操作是:將色譜固定相從色譜柱內打出后,用甲醇浮選,去除其中細小的破碎顆粒;然后用二甲基甲酰胺、丙酮、甲醇超聲清洗;最后干燥固定相,重新裝填色譜柱。經該方法處理的色譜柱,性能可得到顯著提高。
 
  2、色譜柱的保存
 
  色譜柱的保存應按照使用說明書中所指明的溶劑進行填充,盡可能的貯存于100%有機溶劑。色譜柱不能貯存在水或含水量高的溶劑中,會引起微生物的滋生,影響色譜柱壽命。如反相色譜柱長期不用,最好采用90%~95%的有機溶劑混合水溶液保存,防止色譜柱因密封不嚴造成色譜柱兩頭干涸、斷層引起的壽命縮短。
 
  此外,色譜柱還應當輕拿輕放,避免劇烈碰撞引起的色譜柱填料產生塌陷、斷層,縮短使用壽命。
 

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