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色譜定量方法

更新更新時間:2021-08-09

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色譜定量方法
                                                             上海連橋生物科技有限公司

面積歸一法、內標法、外標法、標準加入法。這么多定量法,用哪一種呢?每一種的適用范圍是什么呢?其優缺點又是什么?其標準物又有什么要求呢?看完你就都知道了。

歸一化法

把所有出峰的組分含量之和按100%計的定量方法,稱為歸一化法。

各成分校正因子一致時可用該法,該法簡便、準確,特別是進樣量不容易準確控制時,進樣濃度及進樣量的變化的影響很小。

其他操作條件,如流速、柱溫等變化對定量結果的影響也很小。GC應用廣于HPLC。

外標法(標準曲線法、直接比較法)

首先用欲測組分的標準樣品繪制標準工作曲線。具體作法是:用標準樣品配制成不同濃度的標準系列,在與欲測組分相同的色譜條件下,等體積準確量進樣,測量各峰的峰面積或峰高,用峰面積或峰高對樣品濃度繪制標準工作曲線,此標準工作曲線應是通過原點的直線。若標準工作曲線不通過原點,說明測定方法存在系統誤差。標準工作曲線的斜率即為絕對校正因子。

當欲測組分含量變化不大,并已知這一組分的大概含量時,也可以不必繪制標準工作曲線,而用單點校正法,即直接比較法定量。單點校正法實際上是利用原點作為標準工作曲線上的另一個點。因此,當方法存在系統誤差時(即標準工作曲線不通過原點),單點校正法的誤差較大。因此規定,y=ax+b 。b的絕對值應不大于100%響應值是y的2%。

標準曲線法的優點:繪制好標準工作曲線后測定工作就很簡單了,計算時可直接從標準工作曲線上讀出含量,這對大量樣品分析十分合適。特別是標準工作曲線繪制后可以使用一段時間,在此段時間內可經常用一個標準樣品對標準工作曲線進行單點校正,以確定該標準工作曲線是否還可使用。

標準曲線法的缺點:每次樣品分析的色譜條件(檢測器的響應性能,柱溫度,流動相流速及組成,進樣量,柱效等)很難*相同,因此容易出現較大誤差。另外,標準工作曲線繪制時,一般使用欲測組分的標準樣品(或已知準確含量的樣品),因此對樣品前處理過程中欲測組分的變化無法進行補償。

內標法

選擇適宜的物質作為欲測組分的參比物,定量加到樣品中去,依據欲測組分和參比物在檢測器上的響應值(峰面積或峰高)之比和參比物加入的量進行定量分析的方法稱為內標法。

內標法的關鍵是選擇合適的內標物。內標物應是原樣品中不存在的純物質,該物質的性質應盡可能與欲測組分相近,不與被測樣品起化學反應,同時要能*溶于被測樣品中。內標物的峰應盡可能接近欲測組分的峰,或位于幾個欲測組分的峰中間,但必須與樣品中的所有峰不重疊,即*分開。一般會選擇標準物質的同位素物質作為內標物。

內標法的優點:進樣量的變化,色譜條件的微小變化對內標法定量結果的影響不大,特別是在樣品前處理(如濃縮、萃取,衍生化等)前加入內標物,然后再進行前處理時,可部分補償欲測組分在樣品前處理時的損失。若要獲得很高精度的結果時,可以加入數種內標物,以提高定量分析的精度。

內標法的缺點:選擇合適的內標物比較困難,內標物的稱量要準確,操作較麻煩。使用內標法定量時要測量欲測組分和內標物的兩個峰的峰面積(或峰高),根據誤差疊加原理,內標法定量的誤差中,由于峰面積測量引起的誤差是標準曲線法定量的2-2,但是由于進樣量的變化和色譜條件變化引起的誤差,內標法比標準曲線法要小很多,所以總的來說,內標法定量比標準曲線法定量的準確度和精密度都要好。

標準加入法

標準加入法實質上是一種特殊的內標法,是在選擇不到合適的內標物時,以欲測組分的純物質為內標物,加入到待測樣品中,然后在相同的色譜條件下,測定加入欲測組分純物質前后欲測組分的峰面積(或峰高),從而計算欲測組分在樣品中的含量的方法。

標準加入法的優點:不需要另外的標準物質作內標物,只需欲測組分的純物質,進樣量不必十分準確,操作簡單。若在樣品的前處理之前就加入已知準確量的欲測組分,則可以*補償欲測組分在前處理過程中的損失,是色譜分析中較常用的定量分析方法。

標準加入法的缺點:要求加入欲測組分前后兩次色譜測定的色譜條件*相同,以保證兩次測定時的校正因子*相等,否則將引起分析測定的誤差。

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