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HPLC常見異常峰型

更新更新時間:2021-08-09

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                                  HPLC常見異常峰型

       上海連橋生物科技有限公司

液相色譜儀HPLC分析過程中,由于各種原因,經常會出現一些異常峰形,嚴重影響對結果的分析,給實驗人員帶來很大的困擾。下面潤揚儀器色譜小科介紹一些常見的峰形以及可能的原因:

1. 未出峰    可能的原因:

a. 未成功進樣,或樣品未溶解進溶劑中,或樣品分解變質或樣品濃度太低;

b. 液相色譜儀器本身的問題:泵或者檢測器故障;

c. 流動相選擇不合適,如對于反相硅膠柱來說,若流動相極性太大,是沖不下來一些小極性的物質的,物質一直保留在柱子中,因而不出峰;

d. 檢測器不合適,如有些產品沒有紫外吸收或者吸收很弱,但是檢測還使用了UV檢測器;

2.平頭峰     可能的原因:

a. 樣品濃度過大或進樣體積太大,這個也是大多數原因;

b. 液相色譜儀檢測器設置不正確;

3.負峰     可能的原因:

a. 流動相吸收本底值過高;

b. 進樣過程中進入空氣;

c. 樣品組分的吸收低于流動相;

d. 配制樣品的溶劑與流動相不一致;

4.肩峰     可能的原因:

a. 進樣量過大,樣品濃度過高;

b. 保護柱或色譜柱柱頭堵塞;

c. 保護拄或色譜柱污染或失效;

d. 色譜柱柱頭塌陷;

5.裂峰     可能的原因:

a. 溶劑效應:溶解樣品用的溶劑和起始流動相極性相差太大;

b. 保護柱或色譜柱柱頭堵塞;

c. 保護拄或色譜柱污染或失效;

d. 色譜柱柱頭塌陷;

6.鬼峰     可能的原因:

鬼峰(ghost peak)是在某個譜圖里出現,可能同樣的條件再做一次又不出現了,時有時無的峰。

a. 進樣閥殘余峰,在每次進完樣后用充足的時間來平衡和清洗系統;

b. 樣品中存在未知物,改進樣品的預處理;

c. 流動相污染,更換新流動相(或者換品牌);盡可能現配現用,隔夜的流動相再次使用時要過濾;

d. 流路中有小的氣泡,打開Purge閥,加大流速排除;

7. 前伸峰     可能的原因:

a. 進樣量或樣品濃度高;

b. 溶解樣品的溶劑比流動相極性強;

c. 保護拄或色譜柱污染或失效;

d. 流動相不合適,更換新流動相(調pH或換種類、比例等);

8. 拖尾峰     可能的原因:

a. 進樣量或樣品濃度高;

b. 流動相不合適,更換新流動相(調pH或換種類、比例等);

c. 硅羥基作用:加入三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相pH值,鈍化樣品;

d. 柱內燒結不銹鋼失效:更換燒結不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品;

e. 色譜柱柱頭塌陷或柱效下降:更換色譜柱;

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